Экспериментальные исследования водного экстракта пиявита IN VITRO

Реологические параметры крови и агрегация тромбоцитов.

В настоящем разделе приводятся сравнительные данные по изучению влияния экстракта пиявита и нефракционированного гепарина на реологические свойства крови и агрегацию тромбоцитов (М.В. Каменева, А.С. Парфенов, Э.Л. Климанова с соавт., 1988; M.V. Kameneva, A.S. Parfenov, L.D. Chirkova, I.P. Baskova, 1995). Экстракт пиявита и гепарин были использованы в качестве стабилизаторов крови человека и крысы при соотношении 1:9, при этом 1 мл крови содержал 5U нефракционированного гепарина или 5-6 мг белка водного экстракта пиявита. Сравнительные результаты по оценке вязкости крови, агрегации тромбоцитов, их фильтруемости и механической резистентности представлены в табл. 21 (М.В. Каменева, А.С. Парфенов, Э.Л. Климанова с соавт., 1988).

Агрегация тромбоцитов и механическая резистентность эритроцитов крови, стабилизированной пиявитом, несколько ниже, а фильтруемость эритроцитов выше, чем те же показатели крови, стабилизированной гепарином.

Таблица 21

Влияние гепарина и экстракта пиявита на вязкость крови, агрегацию и механическую резистентность тромбоцитов у крьЮ и больных ИБС (М.В. Каменева, А.С. Парфенов, Э.Л. Климанова с соавт., 1988)
Сокращения, использованные в таблице: АЭ - агрегация эритроцитов; ФЭ - фильтруемость эритроцитов; МРЭ - механическая резистентность эритроцитов.

Интегрально все перечисленные отличия проявляются в более низкой вязкости стабилизированной пиявитом крови при одинаковых значениях показателя гематокрита. Хотя выявленные различия параметров статистически недостоверны, очевидно, что пиявит несколько благоприятнее, чем гепарин, воздействует на реологические свойства крови. Такая же тенденция проявляется при сравнении влияния гепарина и пиявита на реологические параметры крови людей с ИБС.

При проведении описываемых экспериментов наблюдалась спонтанная агрегация тромбоцитов в 5 из 8 проб богатой тромбоцитами плазмы больных ИБС, стабилизированной гепарином, что коррелирует с данными литературы о способности гепарина индуцировать агрегацию тромбоцитов (G.P. Anderson, 1992). В то же время ни в одной из проб такой же крови, стабилизированной пиявитом, не наблюдалось спонтанной агрегации тромбоцитов. АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов была проанализирована также для обеих плазм крови человека. Выявлено выраженное ингибирование агрегации тромбоцитов в плазме крови больных ИБС (рис. 51), стабилизированной пиявитом (M.V. Kameneva, A.S. Parfenov, L.D. Chirkova, LP. Baskova, 1995).

В другой серии экспериментов (И.П. Баскова, Л.Л. Завалова, А.В. Басанова с соавт., 1995) также было обнаружено ингибиро-вание экстрактом из пиявита агрегации тромбоцитов в богатой тромбоцитами плазме крыс. При концентрации белка 0,01 мг/мл экстракт снижал максимальную амплитуду кривой агрегации почти в 6 раз (выраженную как кажущееся сопротивление) с 17,73±12,31 Ом в контроле до 3,48±0,97 Ом в опыте (п=6; р=0,002). Скорость агрегации снизилась с 21,75±19,6 Ом/мин в контроле до 6,22±1,68 Ом/мин в опыте (р=0,038), то есть более чем в 3 раза, хотя продолжительность латентного периода в опыте не отличалась от контрольного значения (И.П. Баскова, Л.Л. Завалова, А.В. Басанова с соавт., 1995).

Влияние на показатели системы свертывания крови.

Водные экстракты пиявита удлиняют время рекальцификации плазмы крови (И.П. Баскова, 1986), ингибируя, как и ССЖ (см. главу 5), контактную стадию внутреннего механизма свертывания крови (рис. 52) путем блокады амидолитической и ки-ниногеназной активностей калликреина плазмы крови человека (И.П. Баскова, С. Халиль, Г.И. Никонов с соавт., 1988), а также путем связывания ионов кальция (И.П. Баскова, 1986).

В опытах in vitro показана способность экстракта пиявит и ССЖ ингибировать активность фактора ХПа, который участвует в активации плазменного гемостаза при участии отрицательно заряженных поверхностей (И.П. Баскова, 1986). Пиявит сохраняет антитромбиновую активность гирудина. При концентрации белка в экстракте 0,8 мг/мл физиологического раствора он в 2 раза удлиняет время свертывания фибриногена тромбином (60-70 с) по сравнению с контролем - 30 с (И.П. Баскова, 1986).

Антикоагулянтная активность экстракта пиявита фиксируется с помощью тромбоэластографа как удлинение параметров плазмы крови «г», время образования фактора Ха и тромбина, и «к», время образования фибринового сгустка (И.П. Баскова, 1986); Этот тест включен в фармакопейную статью предприятия (ФСП) «Пиявит - субстанция» и «Пиявит - капсулы» при аттестации партий препарата, получаемых при его производстве.

Ингибирование протеолитических ферментов.

Пиявит обладает высокой способностью блокировать активность протеолитических ферментов. Так, экстракт пиявита при концентрации белка 5,6 мг/мл блокирует казеинолитическую активность альфа-химотрипсина на 27±6,3%, субтилизина на 66,7±9%, трипсина на 78,12%. Экстракт пиявита дозозависимым образом блокирует амидолитическую активность фактора ХПа и амидолитическую активность калликреина плазмы крови. При концентрации белка 11,5 мг/мл экстракт пиявита ингибирует амидолитическую активность эластазы гранулоцитов человека на 71,2% (И.П. Баскова, 1986).

Антитриптическая и антихимотриптическая активности препарата включены в ФСП «пиявит-субстанция» и «пиявит-капсулы» как обязательные тесты на качество лекарственного препарата при его производстве.

Принятые сокращения
Используемая литература



Заказать препарат "Пиявит"
Число прочтений: 4862